气相色谱法测定冰片中龙脑的含量

・６２・　州医药２００８年第３９卷第５期　ｍｏ￣Ｍｓｍ　ｉｎ　ｓｕｂ・Ｓａｈａｒａｎ　Ａｆｒｉｃａｎ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ：Ｂｅｎｉｎｅｓｅ，　ＨＰＡ・１　ｔｏ　１６一ｔｙｐｅｄ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　ｄｏｎｏｒ　ｒｅｇｉｓｔｒｙ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．　Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００６，１６：３６９－３７４．　Ｃａｍｅｒｏｏｎｉａｎｓ，Ｃｏｎｇｏｌｅｓｅ，ａｎｄ　Ｐｙｇｍｉｅｓ［Ｊ］．Ｔｉｓｓｕｅ　Ａｎｔｉｇｅｎｓ，２００５，６５：２９４－２９８．　［１２］刘达庄．免疫血液学［Ｍ］．上海：上海科学技术出　版社，２００２．１０８．１１０．　［８］林岳兴，朱玲玲，徐建忠，等．浙江汉族人群血小板　抗原１．１６多态性调查［Ｊ］．中国输血杂志，２００７，　２０（６）：４８７４９０．　［１３］　Ｍｅｔｃａｌｆｅ　Ｐ　Ｐｌａｔｅｌｅｔ　ａｎｔｉｇｅｎｓ　ａｎｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　［Ｊ］．Ｖｏｘ　Ｓａｎｇ，２００４，８７（Ｓｕｐｐｌ　１）：８２－８６．　［１４］Ｃ６ｃｉｌｅ　Ｋａｐｌｎ，Ｌｅｅｎｄｅｒａｔ　Ｐｏｒｃｅｌｉｊｎ，Ｐｈｉｌｉｐｐｅ　Ｖａｎｌｉｅｆｅｒｉｎｇ－　ｈｅｎ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉ・ＨＰＡ－９ｂｗ（Ｍａｘ。）ｆｅｔｏｍａｔｅｍａｌ　ｌｌａｏｉｍ．　ｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ，ａ　ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ　ｓｅｖｅｒｅ　ｎｅｏｎａｔａｌ　ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅ—　ｎｉａ：ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｉｅｓ　ｉｎ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｒａｐｙ　ａｎｄ　ｒｅｐｏｒｔ　ｏｎ　［９］杨春晴，姜美林，仉建林，等．潍坊地区汉族献血者　血小板特异性抗原ＨＰＡ・１・１６系统基因多态性研究　［Ｊ］．中国输血杂志，２００８，２１（１）：３１・３３．　［１０］孙国栋，段现民，张彦平，等．献血者血小板．１６抗　原基因遗传多态性分析［Ｊ］．中国实验血液学杂志，　ｅｉｇｈｔ　ｆａｍｉｌｉｅｓ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，２００５，４５（１１）：　２００５，１３（５）：８８９－８９５．　１７９９．１８０３．　［１１］Ｆｅｎｇ　ＭＬ，Ｌｉｕ　ＤＺ，Ｓｈｅｎ　Ｗ，ｅｔ　ａ１．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｎ　（收稿日期：２００８—０７—１０）　气相色谱法测定冰片中龙脑的含量　李结秋徐邦牢廖　军　汤勇才　黄乐升　广州市第一人民医院检验科（５１０１８０）　【摘要】　目的建立毛细管柱气相色谱法测定冰片中龙脑的含量测定。方法在毛细管柱ＦＦＡＰ柱上，采用　程序升温方法，１００～２００￣Ｃ，升温速率１５ｑＥ／ｍｉｎ；２００￣Ｃ，保持５　ｍｉｎ；进样口温度：分流，２７０ｑＥ；分流比：５０：１；　检测器温度：２８０ｑＥ。结果线性范围５￣４００　ｍＳ／ｍｌ，平均回收率１０１．２％，ＲＳＤ：１．１２％（ｎ＝４）。结论本法简单、　快速、结果准确，可用作冰片中龙脑的含量测定方法。　【关键词】　气相色谱法冰片　龙脑异龙脑樟脑　Ｉｎ　ｇａｓ　ｐｈａｓｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｂｏｒｎｅｏｌ　ｂｏｒｎｅｏ　ｃａｍｐｈｏｒ　ｃｏｎｔｅｎｔ　Ｌ／Ｊｉｅｑｉｕ，Ｘｕ　Ｂａｎｇｌａｏ，Ｌｉａｏ　Ｊｕｎ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ｍｕｎｉｃｉｐａｌ　Ｐｅｏｐｌｅ　ｓ　Ｈｏｓｐｉｍｌ　ｏｆ　Ｇｕａｎｚｈｏｕ，　Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，５１０１８０，Ｃｈｉｎａ　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ　ｅｓｔｂａｌｉｓｈｅｓ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ＧＣ　ｗｉｔｈ　ｐａｃｋｅｄ　ｃｏｌｕｍｎ　ｎａｄ　ｃａｐｉｌｌａｒｙ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｃａｍｐｈｏｌ　ｉｎ　ｂｅｒｎｅｏ１．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｉｎ　ｔｈｅ　ＦＦＡＰ　ｐｏｌｅ　ｏｆ　ｃａｐｉｌｌａｒｙ，ａｄｏｐｔｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｃａｌｅｆａｃｔｉｖｅ　ｍｅｔｈｏｄ，ｆｒｏｍ　１００～２００￣Ｃ．Ｓｐｅｅｄ：１５ｑＥ／ｍｉｎ；ｋｅｅｐ　５　ｍｉｎ　ｉｎ　２００￣Ｃ；Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｎｔｒａｎｃｅ：ｄｉｓｔｒｉｂｕｔａｒｙ，２７０￣Ｃ；ｄｉｓｔｒｉｂｕｔａｒｙ　ｒａｔｉｏ：　５０：１：Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅ：２８０￣Ｃ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｒａｎｇｅ：５～４ＯＯ　ｍｇ／ｍｌ；ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｌａｉｍ　ｒａｔｉｏｎ：　１０１．２％，ＲＳＤ＝１．１２％（ｎ＝４）．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ｑｕｉｃｋ，ａｎｄ　ｉｔｓ　ｒｅｓｕｌｔ　ｉｓ　ｅｘａｃｔ．Ｉｔ　Ｃａｎ　ｂｅ　ＵＳｅ　ａｓ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｃａｍｐｈｏｌ　ｉｎ　ｂｅｒｎｅｏ１．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】　Ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；Ｂｏｍｅｏｌ；Ｃａｍｐｈｏｌ；Ｄｉｆ－Ｃａｍｐｈｏｌ；Ｃａｍｐｈｏｒ　冰片分为天然冰片和合成冰片，主要成分为龙脑、异　质量控制。　龙脑和樟脑等　。龙脑是龙脑香科植物龙脑香树脂的加工　１仪器与试药　品或化学合成品。冰片功能开窍醒神，清热止痛。中华人　１．１仪器：Ａｇｉｌｅｓｔ　６８９０Ｎ气相色谱仪。　民共和国药典（２００５年版一部）收载　，含量测定采用气　１．２试药：龙脑、水杨酸甲酯对照品为中国药品生物制品　相色谱法测定：以聚乙二醇ＰＥＧ－２０Ｍ为固定液，涂布浓度　检定所；乙酸乙酯为广州试剂厂；冰片为株洲松本林化有　为１０％。在实际中因担体和装柱的因素，使分离效果不理　限公司，批号：０５１１１１、０６０３０５、０６０６０３、０６１００４。　想。本文建立了毛细管气相色谱（ＧＣ）法　测定冰片中　２样品制备　主要成分龙脑的含量，能有较好的分离度和较高的理论塔　２．１　内标溶液制备：取水杨酸甲酯适量，用乙酸乙酯溶解　板数。本方法操作简单、快速，结果准确，可用于冰片的　并稀释成每１　ｍｌ含５０　ｍｇ的溶液，摇匀，即得　。　维普资讯 http://www.cqvip.com 广州医药２００８年第３９卷第５朔　２．２对照品溶液制备：取龙脑对照品约５０　ｍｇ精密称定，　置ｌ０　ｍｌ量瓶中，加入内标溶液１．０　ｍｌ，加乙酸乙酯至刻　度，摇匀，即得　。　２．３供试品溶液制备：取本品约５０　ｍｇ，精密称定，置ｌ０　ｍｌ量瓶中，加入内标溶液１．０　ｍｌ加乙酸乙酯至刻度，摇　匀，即得　。　３色谱条件　３．１　色谱柱：Ｚｅｂｒｏｎ　ＧＣ　Ｃｏｌｕｍｎ：ＺＢ—ＦＦＡＰ（３０　ｍ×０．２５　ｍｍ×０．２５　ｔｘｍ）。　３．２柱温：１００～２００￣Ｃ，升温速率１５℃／ｍｉｎ；２００￣Ｃ，保　持５　ｍｉｎ；　３．３检测器：ＦＩＤ，２８０℃。　３．４进样口：分流，２７０℃；分流比：５０：１。　３．５载气：Ｎ２，４０　ｍｌ／ｍｉｎ。　３．６尾吹：２０　ｍｌ／ｍｉｎ。　３．７进样量：ｌ　ｌ。　３．８理论塔板数：按龙脑计算，应不低于ｌ０００００。　４方法专属性考察　按所定色谱条件将对照品溶液、供试品溶液分别进样　。２　４　６　ｌ　ｌ，并记录色谱图，结果龙脑对照品峰的保留时间约为　７．３２　ｍｉｎ，内标峰水杨酸甲酯的保留时间约为８．２２　一　ｍｉｎ；色　谱图见图１、２。　图１　龙脑对照品图谱　图２冰片样品图谱　５精密度试验　取龙脑对照品溶液，重复进样６次，按所定的色谱条　件测定，其精密度为：龙脑ＲＳＤ为：０．２６％。表明本方法　的精密度符合气相色谱法定量分析的要求。见表１。　・６３・　表１　冰片精密度试验（ｎ＝４）　测定次数　峰面积比（龙脑／内标）　１．１７ｌ６４　１．１６７４９　１．１７３ｏ０　１．１７２８７　１．１７４２０　１．１６７２８　１．１７ｌ１　０．２６　６线性与线性范围　精密称取龙脑对照品约１．０　ｇ置２０　ｍｌ量瓶中，加乙酸　乙酯至刻度，摇匀，作为贮备液。分别精密量取贮备液　０．１、１．０、２．０、４．０和８．０　ｍ１．置ｌ０　ｍｌ量瓶中，加入内　标溶液１．０　ｍｌ，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，即得。按所定　色谱条件进样测定峰面积，以峰面积比为纵坐标，进样浓　度为横坐标，计算得线性方程（见图３）。　蜂ｌ　豳　积　比１　０　《｝　曩　｝　ｊ　．　！　ｙ＝ｏ．ＯｌＯ７ｘ—ｏ．００９５，　＝ｏ．９９９９８　图３龙脑线性方程　龙脑：Ｙ＝ｏ．ＯｌＯ７Ｘ＋ｏ．００９５，　＝ｏ．９９９９８；在５～４００　ｍｇ／ｍｌ范围内呈良好线性关系。　７重复性试验　取ＸＧ０６０２－０１批冰片，按供试品溶液制备方法，平行　操作６份，制得样品溶液，依法测定，计算结果：龙脑平　均含量为：６０．７％，ＲＳＤ为：０．０６％。见表２。　表２　冰片重复性试验（ｎ＝４）　测定次数　龙脑（％）　ｌ　６Ｏ．７５　６ｏ．６７　６０．７０　４　６０．６８　６０．７４　６　６ｏ．６９　平均含量（％）　６０．７０　ＲＳＤ（％）　０．０６　维普资讯 http://www.cqvip.com ・６４・　８加样回收试验　精密称取ＸＧ０６０２－０１批的冰片样品６份，分别加入一　定量的龙脑对照品，按供试品溶液制备方法制得样品溶液，　按所定的色谱条件进行测定，以龙脑平均含量为６０．７％，　计算回收率。见表３。　表３　冰片加样回收率试验结果（ｎ＝６）　９稳定性试验　精密称取龙脑对照品配制成指定浓度的溶液，于２４　ｈ　内每隔０、２、４、８、１２、２４　ｈ按所定的色谱条件进行测定，　结果２４　ｈ内稳定，龙脑ＲＳＤ为：１．５７％，见表４。　表４　冰片稳定性试验（ｎ＝４）　测定时间（ｈ）　峰面积比（龙脑／内标）　Ｏ　２　４　６　１２　２４　平均　ＲＳＤ（％）　表５　龙脑含量测定结果（ｎ＝４）　１０定量限　精密称取龙脑对照品适量，配制成一定浓度的对照品　溶液，按所定的色谱条件进行测定，得到信噪比为１０：１时　［＝＿Ｉ　｝ｌ医药２００８年第３９卷第５期　的最小定量限为：龙脑０．６　ｇ／ｍｌ　１１　样品测定　取４批冰片样品，按供试品溶液制备方法制得样品溶　液，按所定的色谱条件进行测定，计算含量，结果见表５。　１２耐用性试验　另取Ａｇｉｌｅｎｔ　ＧＣ　Ｃｏｌｕｍｎ：ＨＰ—ＦＦＡＰ（３０　ｍ×０．２５　ｍｍＩＤ　×０．２５　ｍ）毛细管柱，按所定的色谱条件进行测定，计　算样品含量。另取Ｊ＆Ｗ　ＧＣ　Ｃｏｌｕｍｎ　Ｐｅｆｏｒｍａｎｃｅ　Ｓｕｍｍａｒｙ　ＤＢ．　ＦＦＡＰ（３０ｍ×０．２５　ｍｍＩＤ×０．２５　ｍ）毛细管柱，按所定的　色谱条件进行测定，计算样品含量。三种色谱柱测定冰片　样品含量结果见表６。｝　　１　１　表６　耐用性试验龙脑含量测定结果ｎ　＝宝　＂　１　６　４　６　６　Ｏ　∞　（ｎ＝４）卯　　０５１１１１　龙脑（％）　ＺＢ—ＦＦＡＰ　６０．７０　ＨＰ—ＦＦＡＰ　６０．６６　ＤＢ—ＦＦＡＰ　６０．５９　１３讨论　根据实验结果，冰片中含有樟脑、小茴香醇、异龙脑　与龙脑　。实验结果还表明毛细管柱有更高的总柱数，理　想的表面惰性，接近填充柱的负荷量，较长的柱寿命及较　快的分析速度，并可用标准注射器作柱上进样或直接进样，　方便快捷，分辨率好等优点　Ｊ。冰片含量测定用毛细管柱，　可以避开小茴香醇对樟脑的干扰，并且异龙脑与龙脑峰有　良好的分离度，各组份能得到比填充柱更好的分离度和理　论塔板数。柱温从１００℃开始升温，能使各组份峰得到较　好的分离，升温至２００℃，使内标峰加快出峰，缩短分析　时间，控制在１３分钟内。毛细管柱方法操作简单、快速，　结果准确，可以作为测定冰片中龙脑含量的方法之一。　参考文献：　［１］国家药典委员会．中国药典（２００５年版）一部　［Ｓ］．北京：化学工业出版社，２００５．９９—１００．　［２］王箴．化工辞典［Ｍ］．北京：化学工业出版社，　１９６９．　［３］齐凤海，寇登民．气相色谱毛细管柱的制备与发展　［Ｊ］．中华医学实践杂志，２００６，５．　［４］吴红，郭军，等．气相色谱法测定健康人含服速　效救心丸后冰片的血药浓度［Ｊ］．中国药房，２００３，　１４（７）：４１４．　［５］潘金火，严国俊，气相色谱法测定溃可宁贴片中龙脑　的含量［Ｊ］．中成药，２００５，２７（４）：４６９．　（收稿日期：２００８—０４—２４）