・１８・ 现代中西医结合杂志Ｍｏｄｅｒｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１０ Ｊａｎ，１９（１） 激素干预哮喘模型大鼠阴虚、阳虚证候演变的实验研究 杨 婧，刘仁慧，张红月，张 楠，张 翼，刘 苏，王 培，许利平 （首都医科大学中医药学院，北京１０００６９） ［摘要］ 目的 探讨地塞米松干预哮喘模型大鼠治疗不同阶段（撤停前、撤停中、撤停 后）的阴虚与阳虚证候属性。方法 建立大鼠慢性哮喘模型，腹腔注射地塞米松模拟激素干 预过程，观察哮喘大鼠在激素干预不同阶段的症状表现，包括体质量、腋温、爪ｒ值、尾ｒ值。 结果根据阴虚、阳虚证计量标准，激素干预组于激素撤停前阶段属阴虚证，撤停中阶段属阴 亏、阳虚证，撤停后阶段属阴阳两虚证。结论激素干预哮喘模型大鼠在激素应用的不同阶 段具有不同的证候特点。 ［关键词］哮喘；糖皮质激素；证候 ［中图分类号］ Ｒ一３３２ ［文献标识码］ Ａ ［文章编号］ １００８—８８４９ （２０１０）Ｏ１—００１８—０３ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｙｉｎ・ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ａｎｄ Ｙａｎｇ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ａｆｔｅｒ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｉｎ ａｓｔｈｍａｔｉｃ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ Ｙａｎｇ Ｊｉｎｇ，Ｌｉｕ Ｒｅｎｈｕｉ，Ｚｈａｎｇ Ｈｏｎｇｙｕｅ，Ｚｈａｎｇ Ｎａｎ，Ｚｈａｎｇ Ｙｉ，Ｌｉｕ Ｓｕ，Ｗａｎｇ Ｐｅｉ，Ｘｕ Ｌｉｐｉｎｇ （ＴＣＭ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃａｐｉｔａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００６９，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｉｔ ｉｓ ｔＯ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ Ｙｉｎ—ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ａｎｄ Ｙａｎｇ—ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｏｆ ａｓｔｈｍａｔｉｃ ｒａｔｓ ａｔ ｄｉｆ— ｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｓｔａｇｅ ｗｉｔｈ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ（ＧＣ）ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ（ｂｅｆｏｒｅ ｗｉｔｈｄｒａｗｉｎｇ，ｄｕｒｉｎｇ ｗｉｔｈｄｒａｗｉｎｇ ｐｅｒｉｏｄ，ａｆｔｅｒ ｗｉｔｈ— ｄｒａｗｉｎｇ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｈｒｏｎｉｃ ａｓｔｈｍａｔｉｃ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ａｎｄ ｗｅｒｅ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ ｉｎｔｏ ａｂｄｏｍｉｎａｌ ｃａｖｉｔｙ ｔＯ ｓｉｍｕｌａｔｅ ＧＣ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔｓ ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ ｗｅｉｇｈｔ，ａｒｍｐｉｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ａｎｄ ｄｉｇｉｔａｌ ｐｈｏｔｏｓ ａｎａｌｙｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｌｏｕｒ ｏｆ ｃｌａｗ ａｎｄ ｔａｉｌ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｏｆ Ｙｉｎ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ａｎｄ Ｙａｎｇ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＧＣ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ Ｙｉｎ—ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｂｅｆｏｒｅ ｔｈｅ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ ｗｉｔｈｄｒａｗ，Ｙｉｎ—ｌｏｓｓ ａｎｄ Ｙａｎｇ—ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｐｅｒｉｏｄ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ ｗｉｔｈｄｒａｗ ａｎｄ ｂｏｔｈ Ｙａｎｇ—Ｙｉｎ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ａｓｔｈｍａｔｉｃ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｒａｔｓ ｈａｖｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ａｓｔｈｍａ；ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ；ｓｙｎｄｒｏｍｅ 糖皮质激素（ＧＣ）被认为是目前防治哮喘的首选药，但临 期平补阴阳中药协同激素治疗哮喘提供实验基础。 床使用中也存在若干问题，如激素依赖、激素抵抗及局部和全 １ 实验资料 身性不良反应。目前西医学尚无有效的激素替代疗法，而中 １．１实验动物ＳＰＦ级ＳＤ大鼠，雄性，体质量（１２０±１０）ｇ， 医药防治激素不良反应取得了一定成效，但相关研究结果多 由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号： 为临床经验性总结，缺乏相应的实验研究基础支持，尤其对中 ＳＣＸＫ（京）２００７—０００１。 药缓解治疗哮喘患者出现的激素不良反应的中医病机特点规 １．２试剂与仪器 卵清白蛋白（ＯＶＡ，美国Ｓｉｇｍａ公司生 律还缺乏深入研究。本课题旨在观察哮喘模型大鼠在激素干 产）、地塞米松磷酸钠注射液（天津药业焦作有限公司生产）、 预的不同阶段（激素撤停前、撤停中、撤停后）的证候改变，判 ４０２Ａ超声雾化器（江苏鱼跃医疗设备股份有限公司生产）、 断激素干预的不同阶段哮喘大鼠的阴虚、阳虚证候属性，为后 ＲＡＹＴＥＫ ＭｉｎｉＴｅｍｐ ＭＴ４红外线测温仪、Ｃａｎｏｎ数码相机 （ＩＸＵＳ ７５０）。 ［作者简介］ 杨婧（１９８５一），女，硕士研究生在读，研究方向为中 １．３动物分组筛选合格动物９０只，随机分为３大组各３０ 药药性理论和复方研究。 只，即正常对照组、哮喘模型组、激素干预组（于第０天进行证 ［通信作者］刘仁慧，Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉｕｒｅｎｈｕｉ９９５＠１６３．ｃｏｍ；许利平， 候学评价，各组之间无显著性差异）。每大组动物按照不同处 Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｌｐ１９６２＠ｙａｈｏｏ．ｔｏｍ．Ｃｒｌ 死时间随机分为３小组各１０只，即正常对照１，２，３组，哮喘 ［基金项目］ 国家自然基金资助项目（３０８０１４９４）；北京市优秀人 模型１，２，３组，激素干预１，２，３组。其中正常对照１组、哮喘 才资助项目（２００８１ＤＯ５Ｏｌ８Ｏ０２Ｏ９） 模型１组、激素干预１组在第７周结束后处死，正常对照２ 现代中西医结合杂志Ｍｏｄｅｒｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１０ Ｊａｎ，１９（１） ・１９・ 组、哮喘模型２组、激素干预２组在第１１周结束后处死，其余 后）、第４９天（地塞米松０．５ ｍｇ腹腔注射２周）、第６３天（开 组在实验结束后处死。 始地塞米松０．２ ｍｇ腹腔注射之前）、第７７天（开始停用地塞 １．４造模方法建立大鼠哮喘模型，具体方法参见文献［１］。 米松之前）、第９１天（停用地塞米松２周）检测。 在普通哮喘模型制备成功的基础上，激素干预组每日注射地 １．６计量辨证处理及标准ｌ４ ①阴虚程度＝各动物体质量／ 塞米松０．５ ｍｇ／ｋｇ，同时每周２次给予１％ＯＶＡ生理盐水溶 正常组均值（辨证标准：与正常组比较，大于１．２为形丰，小于 液雾化吸人，连用２周至实验第４８天（激素撤停前阶段：第 ０．８５为阴虚，小于０．７为阴亏，小于０．６为液脱）；②阳热程 ３５—４８天）。于实验第４９天开始撤减激素用量，按照每周地 度＝各动物腋温／正常组均数×０．３＋各动物爪ｒ／正常组均 塞米松０．１ ｍｇ／ｋｇ递减，于实验第７７天地塞米松全部撤离 数Ｘ ０．５＋各动物尾ｒ／正常组均数×０．２（辨证标准：与正常 （激素撤停阶段：第４９—７６天）。撤离后继续观察２周至实验 组比较，大于１．０２为阳气盛，小于０．９８为阳虚，小于０．９５为 第９０天（激素撤停后阶段：第７７—９０天）。动物处死前２４ ｈ 阳虚重，小于０．９为阳损）。 行１％ＯｖＡ雾化吸人。 １．７统计学处理 数据采用均数±标准差（ ±Ｓ）表示，组 １．５证候评价参考文献［２—３］略作改进，电子天平测量大 间比较采用方差齐性检验及单因素方差分析，根据方差齐性 鼠体质量；红外线测温仪检测腋温；数码拍摄爪、尾照片，输入 检验结果选择ＬＳＤ（方差齐）或Ｔａｍｈａｎｅ’Ｓ Ｔ２（方差不齐），采 电脑，采用Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ ９．０图像软件进行图像处理，用吸管工 用ＳＰＳＳ １１．０ ｆｏｒ Ｗｉｎｄｏｗｓ软件包完成。 具，读取特定区域的Ｒ、Ｇ、Ｂ（Ｒ代表红色，Ｇ代表绿色，Ｂ代表 ２ 结 果 蓝色）的色度值，按以下公式分别选取爪、尾、舌特定区域定量 ２．１各组动物体质量的比较 实验第４２天开始至实验结 提色度Ｒ、Ｇ、Ｂ，进而求出反映红色程度的ｒ值，ｒ＝Ｒ／（Ｒ＋Ｇ＋ 束，激素干预组体质量较正常对照组及哮喘模型组均显著降 Ｂ）。各指标均于第４２天（地塞米松０．５ ｍｇ腹腔注射１周 低，见表１。 表１ 各组大鼠体质量的比较（ ± ，ｇ） 注：①与正常对照组比较，Ｐ＜０ 叭；②与哮喘模型组比较，Ｐ＜０．０１。 ２．２各组大鼠腋温的比较第４２天激素干预组腋温显著高 ２．３各组大鼠尾ｒ值的比较第４２天激素干预组尾色显著 于另外２组，第４９天激素组显著低于另外２组，第６３天、第 高于另外２组；第４９天哮喘模型组与激素干预组显著高于正 ７７天、第９１天哮喘模型组较正常对照组显著降低，第６３天、 常对照组；第６３天、第７７天激素组较正常对照组及哮喘模型 第７７天激素组较哮喘模型组显著升高，见表２。 组均显著降低，哮喘模型组显著高于正常对照组；第９１天激 表２各组大鼠腋温的比较（ ±Ｓ，℃） 素干预组低于正常对照组，见表３。 组别 第４２天 第４９天 第６３天 第７７天 第９１天 ２．４各组大鼠爪ｒ值的比较 与正常对照组比较，哮喘模 正常对照组 ３４，０８±０．８３ ３４．５９±０ ８２ ３４．６３±０ ７９ ３２．４８±１．０５ ３３ ２６±１．２０ 型组各个时间点的爪ｒ值均无差异；与哮喘模型组比较，激 哮喘模型组 ３４．４２±０ ７８ ３４．４１±Ｏ ７１ ３３．５４±０ ８６￣３１ ２７±１１６②３１ ６６±０９０ｅ ．．素干预组第４２天爪ｒ值升高，第７７天、第９１天显著降低，见 激素干预组 ３５．０９±０ ８Ｏ②③３４ １４±０６６①③３４ １８±１０２＠３１ ９９±１ ０２￣３２０９±０ ４５￣ ，．．表４。 注：①与正常对照组比较，Ｐ＜０ ０５；②与正常对照组比较，Ｐ＜ ２．５计量辨证处理结果 ０．Ｏｌ；③与哮喘模型组比较，Ｐ＜０．０ｌ。 ２．５．１ 阴虚程度处理结果 哮喘模型组体态平稳，介于形丰 表３ 各组大鼠尾ｒ值的比较（孟±Ｓ） 注：①与正常对照组比较，Ｐ＜０．０５；②与正常对照组比较，Ｐ＜０．０１；③与哮喘模型组比较，Ｐ＜０．０５；④与哮喘模型组比较，Ｐ＜０．Ｏ１。 表４ 各组大鼠爪ｒ值的比较（ ±Ｓ） 注：①与哮喘模型组比较，Ｐ＜０．０５；②与哮喘模型组比较，Ｐ＜０．叭。 ・２０・ 现代中西医结合杂志Ｍｏｄｅｒｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１０ Ｊａｎ，１９（１） 与阴虚之间；给予激素治疗后，激素干预组阴虚程度逐渐加 定的改善。见表５。 重，由阴虚发展为阴亏；停药后，仍符合阴虚标准，但较前有一 ２．５．２ 阳热程度处理结果激素干预组第４２天为阳气盛状 表５ 各组大鼠阴虚程度的比较（ ±Ｓ） 注：①与正常对照组比较，Ｐ＜０．【Ｊ１；②与哮喘模型组比较，Ｐ＜０ Ｏ１。 态；随着激素用量的撤停，第７７天开始出现阳虚症状，激素撤 素后会造成肾阴虚、阳虚的病理损害，应采取补肾的药物来防 停后，阳虚程度有加重趋势。见表６。 止激素的不良反应。 表６ 各组大鼠阳热程度的比较（ ± ） 基于前期的实验基础，本项目建立激素干预大鼠哮喘模 型，参照引入上海中医药大学基础医学院方肇勤教授开展的 大小鼠四诊及辨证方法，通过观察哮喘模型大鼠激素干预治 疗的不同阶段（激素撤停前、撤停中、撤停后）动物的四诊相关 检测指标，综合分析判断动物的证候属性，有利于阐明哮喘患 者激素干预过程的中医发病机制，指导临床的辨证用药。 本实验结果与前期实验设想基本一致，激素为助阳之品， 注：①与正常对照组比较，Ｐ＜０．０５；②与正常对照组比较，Ｐ＜ 大剂量应用后机体首先出现阴虚火旺之证；但随着激素的撤 ０．叭；③与哮喘模型组比较，Ｐ＜０．０１。 ３讨 论 停，外来助阳之品减少，加之本病迁延日久，阴损及阳，最终形 哮喘是全球范围内严重威胁公众健康的一种常见慢性 成阴阳两虚、寒热错杂之势。本实验结果为后期应用平补阴 病，按照全球哮喘防治协议（Ｇｌｏｂａｌ ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ ｆｏｒ ａｓｔｈｍａ，ＧＩ— 阳中药协同地塞米松防治哮喘并缓解地塞米松的不良反应提 ＮＡ）２ｏ０７年的统计数字，全世界有３亿人罹患此病，在许多 供了辨证论治的理论基础。 地区１０～２０ ａ哮喘的发病率增加了１倍＿５ Ｊ。近年来，随着对 ［ 参 考 文 献 ］ ［１］刘仁慧，郭忻．培本方调节哮喘大鼠Ｔｈｌ／Ｔｈ２失衡作用的实验 哮喘发病机制中气道炎症学说的建立，具有强大抗炎作用的 研究［Ｊ］．山东中医药大学学报，２００８，３２（５）：４２３—４２５ ＧＣ被认为是目前防治哮喘的首选药物，但实践中使用ＧＣ的 ［２］ 刘小美，方肇勤，卢文丽，等．糖尿病模型大鼠证候的特征及演 全身性或局部性不良反应及激素依赖、激素抵抗等问题，尤其 变［Ｊ］辽宁中医杂志，２００８，３５（１）：１３０ １３４ 是对儿童影响更为显著ｌ。 ｊ。 ［３］卢文丽，方肇勤，潘志强，等．小鼠气、血、阴、阳、虚等八种模型 西医学目前对于哮喘患者激素应用的不良反应，尤其是 四诊的比较和评价［Ｊ］．中国中医基础医学杂志，２００６，１２（６）： 激素敏感性降低（ＳＤＡ）尚无好的激素替代疗法，用传统中医 １７６—１８１ 药防治哮喘是我国的独特优势，积累了宝贵的经验。基于中 ［４］方肇勤，潘志强，卢文丽，等．大鼠、小鼠常见证候计量化辨证方 医“病久及肾”的观点，针对ＳＤＡ病史长的特点，中医认为其 法的建立及其评价［Ｊ］．中国中医基础医学杂志，２００７，１３（７）： 病机与肾虚有关，且由于患者长期大量使用激素，干扰了体内 ５０２—５０５ 的阴阳平衡，往往表现为阴阳俱损。如有医家认为ＳＤＡ是因 ｌ５ｊ Ｂｏｕｓｑｕｅｔ Ｊ，Ｃｌａｒｋ ＴＪ，Ｈｕｒｄ Ｓ，ｅｔ ａ１．ＧＩＮＡ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｏｎ ａｓｔｈｍａ 宿痰久伏，久病伤及肾阳，加之久用ＧＣ而抑制内源性肾上腺 ａｎｄ ｂｅｙｏｎｄ［Ｊ］．Ａｌｌｅｒｇｙ，２００７，６２：１０２—１１２ 皮质激素的产生，致肾阳益虚，阳损及阴，阴损及阳，肾中阴阳 ［６］ 张廷熹．哮喘儿童吸入糖皮质激素的全身副作用［Ｊ］．Ｉ临床儿科 俱损，。肾虚（ＧＣ敏感性降低）于下，痰（慢性气道炎症）伏于上， 杂志，２００４，２２（１０）：７０３—７０４ 上实下虚，虚实夹杂＿８ Ｊ。 ［７］Ｂａｒｎｅｓ ＰＪ，Ｗｏｏｌｃｏｃｋ ＡＪ．Ｄｉｆｆｉｃｕｌｔ ａｓｔｈｍａ［Ｊ］．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏ— ｒｙ Ｊｏｕｒｎａｌ，１９９８，１２：１２０９—１２１８ 目前哮喘患者应用激素过程中的中医病机特点规律尚缺 ［８］ 崔悦，周旭生．固本咳喘丸治疗激素依赖性支气管哮喘的Ｉ临床 乏深入研究，但在中医证的模型研究中已经采用激素模拟肾 观察［Ｊ］中国中医药科技，２００１，８（３）：１８９—１９０ 虚证，如给予连续注射大剂量地塞米松，动物出现活动度增 ［９］卢文丽，方肇勤．阳虚证动物模型的造模方法与评析［Ｊ］．上海 强、烦躁、易激惹、饮水增多、大便干燥等。肾阴虚证；若采用地 中医药大学学报，２００４，１８（４）：４４—４８ 塞米松连续注射后，停药２周左右，动物则出现皮毛竖立、蜷 ［１０］付晓伶，方肇勤．阴虚证动物模型的造模方法及评析［Ｊ］．上海 曲扎堆、行动迟缓、反应迟钝、尾凉黯淡、背温下降、自发活动 中医药大学学报，２００４，１８（２）：５１—５４ 时间降低等。肾阳虚证Ｉ９ 。故从中医观点出发，机体应用激 ［收稿日期］２００９ ０７—１５