不同急性应激反应大鼠模型的比较

２０１６年１２月　中国比较医学杂志　ＣＨＩＮＥＳＥ　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１６　Ｖｏｌ＿２６　ＮＯ．１２　第２６卷第１２期　不同急性应激反应大鼠模型的比较　胡　越，熊威威，谭　毅，黄志华，李爱国，蒋奕红　（桂林医学院附属医院麻醉科，桂林５４１００１）　【摘要】　目的　比较三种急性应激反应动物模型应激相关指标的变化，探讨建立相对适宜的急性应激反应　模型。方法健康成年雄性ＳＤ大鼠４Ｏ只，随机数字表法分为正常组（Ｉ）、断尾组（Ⅱ）、烧伤组（Ⅲ）和截肢组　（Ⅳ），每组ｌＯ只。正常组不做处理，断尾组在靠近尾端的尾干处（即ｓ３和Ｓ４脊髓神经之间）横切，烧伤组制成　３０％体表面积ＩＩＩ度烫伤模型，截肢组以左下肢截肢作为严重创伤应激。应用酶联免疫法检测各组大鼠血清促肾　上腺皮质激素（ａｄｒｅｎｏｃ０ｒｆｉｃｎＩｒ０ｐｉｃ　ｈｏｒｍｏｎｅ，ＡＣＴＨ）和皮质醇（ｃｏｒｔｉｅｏｓｔｅｒｏｎｅ，ＣＯＲＴ）的含量，免疫组织化学方法检测　下丘脑ｃ—ｆｏｓ蛋白的表达水平。结果　与Ｉ组相比，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组ＡＣＴＨ、ＣＯＲＴ水平均升高（Ｐ＜０．０５），ｃ—ｆｏｓ蛋白表　达明显增加（Ｐ＜０．０５）。与Ⅲ组相比，Ⅱ、Ⅳ组ＡＣＴＨ、ＣＯＲＴ水平、ｃ—ｆ０ｓ蛋白表达较高（Ｐ＜０．０５）；但ＩＩ组与ＩＶ组　各项指标相比差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论通过低位尾干切断制作急性应激反应模型，具有操作步骤简　单、致伤程度较一致、应激效果明显等特点，能够较客观地反映人类遭遇突发事故时的应激反应，是较为理想的急　性应激反应的建模方式。　【关键词】　急性应激反应；大鼠；模型；断尾　【中图分类号】Ｒ一３３　【文献标识码】Ａ　【文章编号】１６７１—７８５６（２０１６）１２—００５１—０４　ｄｏｉ：１０．３９６９．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１—７８５６．２０１６．１２．０１０　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｒａｔ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ａｃｕｔｅ　ｓｔｒｅｓｓ　Ｙｅｓｐｏｎｓｅ　ＨＵ　Ｙｕｅ，ＸＩＯＮＧ　Ｗｅｉ—ｗｅｉ，ＴＡＮ　Ｙｉ，ＨＵＡＮＧ　Ｚｈｉ—ｈｕａ，ＬＩ　Ａｉ—ｇｕｏ，ＪＩＡＮＧ　Ｙｉ—ｈｏｎｇ　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ，Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｇｕｉｌｉｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕｉｌｉｎ　５４１００１）　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｃｏｍｐａｒｅ　ｔｈｒｅｅ　ｒａｔ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ａｃｕｔｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ａｎｄ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ａｎ　ｉｄｅａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｒａｔ　ｍｏｄｅｌ　ｆｏｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ａｃｕｔｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ａ　ｔｏｔａｌ　ｏｆ　４０　ｃｌｅａｎ　ｇｒａｄｅ　ｍａｌｅ　ＳＤ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ（ｂｙ　ｒａｎｄｏｍ　ｎｕｍｂｅｒ）ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　４　ｇｒｏｕｐｓ（ｎ＝１　０　ｅａｃｈ）：Ｎｏｒｍａｌ　ｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐ　Ｉ），ｃａｕｄａｌ　ｔｒｕｎｋ　ｔｒａｎｓｅｃｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐ　ＩＩ），ｂｕｒｎ　ｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐ　ＩＩＩ），ａｎｄ　ａｍｐｕｔａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐ　ＩＶ）．Ｔｈｅ　ｇｒｏｕｐ　Ｉ　ｒｅｃｅｉｖｅｄ　ｎｏ　ｓｐｅｃｉａｌ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｔｈｅ　ｇｒｏｕｐ　ＩＩ　ｒｅｃｅｉｖｅｄ　ｉｎｆｅｒｉｏｒ　ｃａｕｄａｌ　ｔｒｕｎｋ　ｔｒａｎｓｅｃｔｉｏｎ　ａｔ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｓａｃｒａｌ　ｓｐｉｎａｌ　ｎｅｒｖｅ　３　ａｎｄ　４（ｓ３，ｓ４），ｔｈｅ　ｇｒｏｕｐ　ＩＩ１　ｗａｓ　ｉｎｆｌｉｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　３０％ｔｏｔａｌ　ｂｏｄｙ　ｓｕｒｆａｃｅ　ａｒｅａ（ＴＢＳＡ）ｇｒａｄｅ　３　ｂｕｒｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｂａｃｋ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｇｒｏｕｐ　ＩＶ　ｈａｄ　ａｎ　ａｍｐｕｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌｅｆｔ　ｌｏｗｅｒ　ｌｉｍｂ　ａｓ　ｓｅｖｅｒｅ　ｔｒａｕｍａｔｉｃ　ｓｔｒｅｓｓ．Ｒａｔｓ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｋｉｌｌｅｄ　ａｔ　３０　ｍｉｎｕｔｅｓ　ａｆｔｅｒ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｂｌｏｏｄ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ｏｒｆ　ｍｅａｓｕｒｉｎｇ　ｓｅｒｕｍ　ａｄｒｅｎ０ｃｏｒｔｉｃｏｔｒ０ｐｉｃ　ｈｏｒｍｏｎｅ（ＡＣＴＨ）ａｎｄ　ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅ（ＣＯＲＴ）ｌｅｖｅｌｓ　ｂｙ　ＥＬＩＳＡ．　Ｔｈｅ　ｃ—ｌｏｓ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ　ｔｉｓｓｕｅ　ｗａｓ　ｅｘａｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｉｍｍｕｎ０ｈｉｓｔ０ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｇｒｏｕｐ　Ｉ，ｓｅｒｕｍ　ＡＣＴＨ　ａｎｄ　ＣＯＲＴ　ｌｅｖｅｌｓ，ａｎｄ　ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｃ—ｆｏｓ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｒｏｕｐ　ＩＩ，ＩＩＩ，ＩＶ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｇｒｏｕｐ　ＩＩＩ，ｓｅｒｕｍ　ＡＣＴＨ　ａｎｄ　ＣＯＲＴ　ｌｅｖｅｌｓ，ａｎｄ　ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｃ—ｆｏｓ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｒｏｕｐ　ＩＩ　ａｎｄ　ＩＶ（Ｐ＜０．０５），ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｇｒｏｕｐ　ＩＩ　ａｎｄ　ＩＶ（Ｐ＞０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　Ｔｈｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｃｕｔｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｍｏｄｅｌ　ｉｎｄｕｃｅｄ　［基金项目］２０１２年广西高校学校科研项目（编号：２０１２０４ＬＸ２４３）；２０１４年桂林市科学研究与技术开发计划课题（编号：２０１４０３１０．２—３）。　［作者简介］胡越（１９８９一），女，硕士研究生，研究方向：围术期应激反应调控的研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｎｅｅｄｐａｐｅｒ＠１６３．ＣＯＢ。　［通讯作者］蒋奕红（１９６９一），女，主任医师，研究方向：临床麻醉学（复合麻醉、麻醉与应激）研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉａｎｇｙｉｈｏｎｇ＠１６３．ｃｏｒｎ。　５２　中国比较医学杂志２０１６年１２月第２６卷第１２期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｃｏｍｐ　Ｍｅｄ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　２０１６，Ｖｏ１．２６．Ｎｏ．１２　ｂｙ　ｉｎｆｅｒｉｏｒ　ｃａｕｄａｌ　ｔｒｕｎｋ　ｔｒａｎｓｅｃｔｉｏｎ　ｈａｓ　ｓｉｍｐｌｅ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ｓｔｅｐｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｄｕｃｅｓ　ａ　ｔｒａｕｍａｔｉｃ　ｉｎｊｕｒｙ　ｔｏ　ａ　ｓｉｍｉｌａｒ　ｄｅｇｒｅｅ．ａｎｄ　ｑｕｉｔｅ　ｗｅｌｌ　ｒｅｆｌｅｃｔｓ　ｔｈｅ　ａｃｕｔｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｉｎ　ｈｕｍａｎｓ　ｃａｕｓｅｄ　ｂｙ　ｓｕｄｄｅｎ　ａｃｃｉｄｅｎｔ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ　ｉｔ　ｉｓ　ａ　ｑｕｉｔｅ　ｇｏｏｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａｃｕｔｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ａｎｄ　ｄｅｓｅｒｖｅｓ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】　Ａｃｕｔｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ；Ｒａｔ；Ｍｏｄｅｌ；Ｄｏｃｋｉｎｇ　ｔａｉｌ；Ｉｎｆｅｒｉｏｒ　ｃａｕｄａｌ　ｔｒｕｎｋ　ｔｒａｎｓｅｃｔｉｏｎ　近几十年，全球地震、洪水等自然灾害频繁发　生，各种大型集会活动出现拥挤和踩踏事件，均造　成大规模的人员伤亡，应激与疾病的关系已引起人　们的重视。进行急性应激反应的研究，首先要复制　各组操作前均腹腔注射２％戊巴比妥钠（４０　ｍｇ／　ｋｇ）。参考文献的方法，Ｉ组采用低位尾干切断　（ｉｎｆｅｒｉｏｒ　ｃａｕｄａｌ　ｔｒｕｎｋ　ｔｒａｎｓｅｃｔｉｏｎ）的方法模拟急性应　激，即用鼠笼固定大鼠后，在靠近尾端的尾干处（Ｓ３　标准的、重复性强的急性应激反应动物模型，但对　于急性应激反应的动物模型的制作，目前国内外尚　缺乏统一标准。当前研究急性应激的模型有束缚、　烧伤、电击、截肢、模拟腹腔探查术等模型，根据斯　坦福急性应激反应问卷（ＳＡＳＲＱ）评分结果得知，创　伤性骨折、烧伤诱发急性应激反应较其他类型创伤　更为严重¨　，因此截肢和烧伤模型是研究急性应　激反应的常用模型，但因其造模步骤较复杂，不可　避免会复合多种刺激给实验结果造成干扰。断尾　模型多应用于疼痛研究，而其在急性应激反应的研　究目前鲜有报道。本实验通过比较以上３种造模方　法，观察血清ＡＣＴＨ、ＣＯＲＴ浓度和下丘脑ｃ—ｆ０ｓ蛋白　表达的变化，探讨较适宜研究急性应激反应病理生　理变化的动物模型。　１材料和方法　１．１实验动物　健康雄性Ｓｐｒａｇｕｅ　Ｄａｗｌｅｙ大鼠４０只，ＳＰＦ级，体　重２８０～３１０　ｇ，由桂林医学院实验动物中心提供，许　可证号『ＳＣＸＫ桂２０１３—０００１］。受试动物在桂林医　学院实验动物中心动物房饲养，许可证号［ＳＹＸＫ桂　２０１３—０００１］。自由饮水摄食，保持动物笼具清洁　干燥，适应环境７　ｄ后进行实验研究。将大鼠按随　机数字法分成正常组（Ｉ）、断尾组（Ⅱ）、烧伤组　（Ⅲ）和截肢组（Ⅳ），每组ｌ０只。　１．２主要试剂与仪器　大鼠ＡＣＴＨ、ＣＯＲＴ　ＥＬＩＳＡ试剂盒（Ｃｕｓａｂｉｏ公　司），兔抗人多克隆ｃ．ｆ０ｓ抗体（１：１０００，Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ公　司），ＳＡＢ试剂盒（武汉博士德生物技术公司），ＤＡＢ　试剂盒（Ｓｉｇｍａ公司），苏木素一伊红（ＨＥ）染色试剂　盒（上海碧云天生物技术有限公司）；Ｏｌｙｍｐｕｓ　ＢＸ５１　显微镜（Ｏｌｙｍｐｕｓ公司），石蜡切片机（德国Ｌｅｉｃａ公　司），微量加样枪（德国Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司）。　１．３动物模型分组与制备　为消除麻醉药物对机体应激反应的保护作用，　和Ｓ４脊髓神经之间）横切　；Ⅱ组备皮后于９２￣Ｃ　水温中浸烫１８　Ｓ造成３０％体表面积（ＴＢＳＡ）Ⅲ度　烫伤模型　；Ⅳ组于左下肢足面上约０．５　ｅｍ处行截　肢术，术后无菌纱布包扎　；正常组不做处理。各　组均于模型建立３０　ｍｉｎ后处死动物，检测有关　指标。　１．４血清ＡＣＴＨ、ＣＯＲＴ浓度的检测　为排除皮质醇昼夜节律性的干扰，实验中取　血时间控制在上午Ｉ２点左右。模型建立后３０　ｍｉｎ，常规胸腹联合切口，开胸后经右心房用不凝　管取血５　ｍＬ，血样室温放置２　ｈ后，３５００　ｒ／ｍｉｎ，　４℃离心１５　ｍｉｎ，取上清液一２０℃保存，采用　ＥＬＩＳＡ试剂盒检测ＡＣＴＨ和ＣＯＲＴ含量，严格按　照试剂盒说明操作。　１．５　下丘脑组织免疫组织化学染色　取血后即刻经左心室依次用０．９％生理盐水、　４％多聚甲醛灌注大鼠后，断头取脑，置于４％多聚　甲醛固定液中４￣Ｃ保存，４８　ｈ后行梯度酒精脱水、二　甲苯透明、５６℃浸蜡、包埋。石蜡连续切片直至切到　下丘脑部位，常规脱蜡至水，浸泡３％Ｈ：Ｏ　和去离　子水，孵育１０　ｒａｉｎ，消除内源性过氧化物酶活性。滴　加正常山羊血清工作液，孵育３０　ｍｉｎ，滴加ｃ—ｆｏｓ兔　抗人抗体（１：１０００）４￣Ｃ过夜，滴加生物素化标记二　抗工作液，辣根过氧化酶链霉卵白素工作液，ＤＡＢ　显色３～５　ｍｉｎ，苏木素复染、返蓝，梯度酒精脱水，二　甲苯透明，中性树胶封片，拍照。每组１０只大鼠，每　只大鼠选取２张切片观察，每张切片随机取５个高　倍视野（×２００）算得阳性细胞总和，采用Ｏｌｙｍｐｕｓ　ＢＸ５１显微镜（Ｏｌｙｍｐｕｓ公司）拍照并计数ｃ—ｆ０ｓ阳性　细胞数。　１．６统计学方法　采用ＳＰＳＳ　１８．０软件进行数据分析，计量资料　以　±Ｓ表示，多组问比较采用单因素方差分析，组　间两两比较采用最小显著性差异法（ＬＳＤ法）检验，　中国比较医学杂志２０１６年１　２月第２６卷第１２期　Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｃｏｍｐ　Ｍｅｄ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　２０ｌ６，Ｖｏ１．２６　Ｎｏ．１２　５３　以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　２　结果　３　讨论　理想的动物模型是急性应激反应研究的基础，　应该与临床产生应激的机制相近，模拟突发状况对　２．１　各组外周血血清ＡＣＴＨ、ＣＯＲＴ含量　与Ｉ组相比，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组ＡＣＴＨ、ＣＯＲＴ水平均　升高（Ｐ＜０．０５）。与Ⅲ组相比，Ⅱ、Ⅳ组ＡＣＴＨ、　ＣＯＲＴ水平较高（Ｐ＜０．０５）；ＩＩ组与Ⅳ组相比，两组　间的ＡＣＴＨ和ＣＯＲＴ水平差异无统计学意义（Ｐ＞　０．０５），见表１。　表１各组火鼠血清ＡＣＴＨ和血清ＣＯＲＴ　含域（ｎ＝１０，ｉ±Ｓ）　Ｔａｂ．１　Ｃｏｎｔｅｎｔｓ　０ｆ　ｓｅｒｕｎｌ　ＡＣＴＨ日ｎＩＩ（　（）ＲＴ　ｊＹｉ　ｔｈｅ　ｒａｔｓ　机体造成的创伤。动物存活时间足够长，不影响做　后续的实验研究。模型制作简单，诱导因素单一，　模型重复性好，造成急性应激的同时尽量避免触发　其他应激源对应激指标结果的干扰。临床上创伤　患者大多由交通意外、殴打、工作意外、火灾等致　伤，因此本实验选择具有代表性的创伤性骨折模型　和烧伤模型与新型断尾模型比较，通过对比各组大　鼠建模成功后促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）和皮质醇　（ＣＯＲＴ）水平，下丘脑ｃ—ｆｏｓ蛋白表达水平来评估各　组动物的应激状态。　组别Ｇ　ｒｏｕｐｓ　ＡＣＴＩｔ（ｐｇ／ｍＬ）　ｃ０Ｒ　Ｉ（ｎｇ／ｍＬ）　在实验动物的血样收集过程经常伴有其他应　激源刺激，比如束缚　，从而影响结果的准确性。　注：与１组比较，　Ｐ＜０．０５；与Ⅲ组比较，　Ｐ＜０．０５　Ｎｏｔｅ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｇｒｏｕｐ　Ｉ．　Ｐ＜０．０５：ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｇｒｏｕｐ　颈静脉置管为多次采血提供了可能性，且采血量充　足，适用于慢性应激反应的研究。一般为了实验的　ｍ，　Ｐ＜０　０５．　顺利进行，会选择术前７天置管，对急性应激反应的　２．２各组下丘脑组织ｃ．１ｏｓ蛋白表达情况　各组大鼠下丘脑ｃ—ｆｏｓ蛋白均有表达，阳性细胞　呈暗棕黄色，胞核染色。结果显示，Ｉ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组　ｃ—ｆｏｓ蛋白阳性细胞量分别为（５１．Ｏ０±３．７４）、　（１４８．８０±６．０９）、（９４．７０±５．７０）和（１５２．４０－４－　研究而言，这就是弊端。导管的同定影响实验动物　的舒适度和灵活性，且导管本身作为一种异物可能　会引发炎症反应，产生应激，进一步影响ＨＰＡ轴的　功能　。为了使本研究结果更有说服力，我们对各　组大鼠断头后立即心脏取血５　ｍＬ，ⅡＩＬ量充足便于　ＡＣＴＨ和ＣＯＲＴ检测，同时也尽量减少无关应激　反应。　４．１７）。与Ｉ组相比较，Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组ｃ—ｆｏｓ蛋白　表达明显增加（Ｐ＜０．０５）；与Ⅲ组相比，Ⅱ、Ⅳ组ｃ　ｆｏｓ蛋白表达水平较高，差异有统计学意义（Ｐ＜　０．０５）；１１组与Ⅳ组的ｃ—ｆｏｓ蛋白表达水平差异无统　机体受到创伤后，下丘脑一垂体一肾上腺皮质　（ＨＰＡ）轴激活，外周　中促肾上腺皮质激素　（ＡＣＴＨ）和皮质醇（ＣＯＲＴ）水平迅速升高。本实验　计学意义（Ｐ＞０．０５），见图１。　Ａ１　Ｂ１　Ｃ１　。　Ｄ１　２０ｕｍ　’　Ｂ２　‘　Ｃ２　●　－　Ｄ２　●　，　●　　●●　●　注：Ａ正常组；Ｂ断尾组；Ｃ烧伤组；Ｄ截肢组；１—２：各组２个视野　图１　下丘脑ｃ—ｆ０ｓ蛋白表达（标尺＝２Ｏ　ｍ）　Ｎｏｒｍａｌ　ｇｒｏｕｐ；Ｂ１，Ｂ２：Ｄｏｃｋｉｎｇｔａｉｌ　ｇｒｏｕｐ；Ｃ１，Ｃ２：Ｂｕｒｎ　ｇｒｏｕｐ；Ｄ１，Ｄ２：Ａｍｐｕｔａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ．　Ｆｉｇ．１　ｃ—Ｆｏｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ　ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ（Ｂａｒ＝２０ｔｘｍ）　５４　中国比较医学杂志２０１６年１２月第２６卷第１２期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｃｏｍｐ　Ｍｅｄ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　２０１６，Ｖｏ１．２６　Ｎｏ．１２　结果显示，Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组血清ＡＣＴＨ和ＣＯＲＴ水　平相对Ｉ组明显升高，即各组急性应激反应模型均　制备成功。严重烧伤对于机体而言是一种强烈的　刺激，烧伤创面坏死组织持续存在、烧伤后继发炎　性反应、机体的体液丢失等一系列应激源同时或相　继作用，会进一步诱发应激。实验中发现，Ⅱ组与　Ⅲ组作用效果比较时，Ⅲ组ＡＣＴＨ、ＣＯＲＴ水平略低　于Ⅱ组，说明烧伤组应激水平低于断尾组。对实验　动物行烧伤处理大多选择麻醉后备皮再行热水烫　伤，整个造模过程中必不可少复合了束缚应激，加　之水浴烫伤对大鼠的烧伤面积和深度难以准确把　握，需经病理切片证实，因此烧伤模型的制备是复　合应激的过程，涉及到各种应激源的综合作用，用　来模拟突发、不可预料的急性创伤不如断尾模型。　一些学者偏爱对大鼠行截肢处理建立急性应激反　应模型，即麻醉后固定体位，于左侧腹股沟处切开　［　ｌ　］　皮肤，游离出股动、静脉及其他分支血管再于膝关　节上方１．２　ｅｍ处截肢。这种方式可以避免大鼠出　血过多诱发休克，因为休克本身也会诱发机体产生　应激反应，影响大鼠实验室指标的结果。本实验为　了使应激反应更单纯，选择的截肢方式较直接，无　需结扎血管，选择相对远心端的部位。研究结果显　示，Ⅱ组与Ⅳ组相比应激水平差异无统计学意义，　且实验中发现ＩＩ组出血量比ＩＶ组较少，证明断尾　模型可以模拟创伤断肢患者的应激反应，更适合作　为急性应激反应的模型。　正常情况下，神经元内的ｃ—ｆｏｓ蛋白水平很低，　一旦出现应激源刺激则可诱发ｃ—ｆｏｓ在１０　ｍｉｎ之内　进行表达。已有文献证实　，下丘脑室旁核（ＰＶＮ）　部位的ｃ—ｆｏｓ蛋白能调节促肾上腺皮质激素释放激　素（ｅｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｎ　ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｈｏｒｍｏｎｅ，ＣＲＨ）的表达，通　过调节ＣＲＨ的表达，进而控制促肾上腺皮质激素　（ＡＣＴＨ）的分泌，启动ＨＰＡ轴，影响与应激有关的　行为。本研究发现，与Ｉ组相比，Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组　ｃ—ｆｏｓ蛋白表达明显增高，Ⅲ组ｃ—ｆｏｓ蛋白略低于Ⅱ和　Ⅳ组，Ⅱ组与Ⅳ组的ｃ—ｌｏｓ蛋白水平差异无统计学意　义，说明ｃ—ｆｏｓ表达趋势和ＡＣＴＨ、ＣＯＲＴ这两个应激　的关键指标有明显一致性，提示了上述因子参与了　急性应激反应的发生和发展，也进一步地证实了三　组大鼠均造模成功，断尾是相对理想的造模方式。　国内外早有应用断尾作为外周神经疼痛的模　型　，本课题组发现低位尾干切断模型大鼠的行为　学表现与人体创伤性骨折在感觉变化和症状上的　表现相似。断尾模型造模关键步骤简单，致伤程度　较一致，可重复性高以及术后并发症少，应激相关　指标表达显著，能够较客观地反映人类遭遇突发状　况时的应激反应。综上所述，相比于烧伤和截肢模　型，断尾模型是较适宜应用于研究急性应激反应的　制模方法。　参考文献：　李阳，陈长香．斯坦福急性应激反应问卷在创伤性骨折患者　中的应用［Ｊ］．中国康复理论与实践，２０１５，１１（０６）：７１７—　７２２．　孙月吉，张淑玲，刘启贵，等．烧伤患者可疑急性创伤后应激　［　［　［　［　［　障碍及其相关因素分析［Ｊ］．中国临床康复，２００５，３　４　５　６　７　９（２８）：５４　］　］　］　］　］　５７．　Ｘｕ　Ｂ，Ｄｅｓｃａｌｚｉ　Ｇ，Ｙｅ　ＨＲ，ｅｔ　ａ１．Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ　ｐａｉｎ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｐａｉｎ，２０１２，８（１）：１　—８．　万义福，许宝华，张玉珍，等．大鼠严重烧伤后心肌细胞　ＧＲＰ９４表达变化及其意义［Ｊ］．中国比较医学杂志，２００８，　１８（０２）：４３　４７．　杨志红，钟历勇，王惠．创伤应激对糖尿病大鼠ＴＮＦ．Ｏｔ、ＩＩ　一６、　ＮＯ及氧化应激的影响［Ｊ］．内科急危重症杂志，２００４，１０　（４）：１９７—１９９，２１１．　王逸，卢聪，宋广青，等．慢性束缚应激对ＳＤ和Ｗｉｓｔａｒ大鼠　学习记忆能力的影响［Ｊ］．中国实验动物学报，２０１４，２２　（０２）：４０—４４　Ｔｈａｎｏｓ　ＰＫ，Ｃａｖｉｇｅｌｌｉ　ＳＡ，Ｍｉｃｈａｅｌｉｄｅｓ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｎｏｎ—ｉｎｖａｓｉｖｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｓｔｒｅｓｓ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｉｎ　ｒｏｄｅｎｔｓ：　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｉｒｃａｄｉａｎ　ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅ　ｒｈｙｔｈｍ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌ　Ｒｅｓ，２００９，５８（２）：２１９—２２８．　张云东，朱佩芳，王正国，等．大鼠严重创伤后早期下丘脑ｃ—　ｏｆｓ和ＣＲＨ　ｍＲＮＡ的表达［Ｊ］．第三军医大学学报，２００３，　２５（１１）：９６５—９６７．　Ｎａ　ＨＳ，Ｈａｎ　ＪＳ，Ｋｏ　ＫＨ，ｅｔ　ａｌ　Ａ　ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ　ｍｏｄｅｌ　ｆｏｒ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｉｎ　ｒａｔ　Ｓ　ｔａｉｌ　ｂｙ　ｉｎｆｅｒｉｏｒ　ｃａｕｄａｌ　ｔｒｕｎｋ　ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ　Ｌｅｔｔ．１９９４，１７７（１—２）：５０—５２．　［修回日期］２０１６—０９—０６　［　［　２　］　８　］