大肠杆菌感受态细胞的制备
1. 大肠杆菌涂LB平板，37℃过夜培养（16-18h）
2. 挑取LB平板的单菌落于5 mL液体LB培养基中，37℃培养过夜（17h左右） 3. 按10%接种量，5 mL 50 mL LB液体培养基，37℃培养1.5h~2h，OD600 为
0.5~0.6
4. 冰浴预冷培养物、无菌离心管、无菌0.1M氯化钙、0.1M氯化镁、含20%甘
油的0.1M氯化钙
5. 把培养物到入无菌离心管，离心，4℃，3 min，4000 rpm 6. 弃上清，加入10 mL 0.1M氯化镁，混匀。 7. 放置冰上5 min
8. 离心，4℃，3 min 4000 rpm
9. 弃上清，加预冷的0.1M氯化钙4 mL，混匀 10. 放于冰上至少15min 11. 离心，4℃，3min 3000rpm
12. 弃上清，加入 2 mL 氯化钙(含20%的甘油) 13. 分装，每管100 uLl，并立即放于冰上 14. 冰上放置8-10 h后放于-80℃保存箱中。 试剂：
1. LB培养基：胰蛋白胨 1%、酵母提取物 0.5%、NaCl 1% 2. 0.1mol/L MgCl2 3. 0.1mol/L CaCl2.2H2O
4. 20%甘油的0.1mol/L CaCl2.6H2O
