T
echnology
科技
分析与检测
用改良的酶比色法测定婴幼儿乳粉中胆碱的含量
□ 张 琳 贾 俊 吉林省产品质量监督检验院 曲玉超 吉林天圆检测有限责任公司 付连娟 吉林省产品质量监督检验院 武旭明 冯 吉 长春工业大学化学与生命科学学院
摘 要：目的是建立一种改良的酶比色法，去除维生素C等还原性物质对酶氧化反应的影响，并减小背景值，使测试结果更加准确。经测试该方法在0.075～0.225 mmol范围内线性关系良好。标准曲线方程为y=0.003 3x-0.018 2，相关系数R2=0.999 3，线性良好。结论为该方法准确、可行、高效,适用于婴幼儿乳粉中胆碱含量的测定。
关键词：胆碱；婴幼儿乳粉；酶比色法胆碱（choline）是一种强有机
品、过氧化氢酶、胆碱氧化酶、磷脂酶D,4-氨基安替比林、三羟甲基氨基炭粉，以上试剂皆为分析纯。甲烷、盐酸、氢氧化钠与苯酚，活性
调pH为3.5～4.0，加入0.5～2.0 g活性炭后涡旋振荡，离心过滤，将水解后的上清液转入50 mL容量瓶中。加入12倍配置好的酶反应液，同时应液进行测定。
2.3 实验步骤分析
碱性化合物，在动物有机体内的存在形式主要为游离态胆碱、乙酰胆碱、卵磷脂或鞘磷脂等。胆碱及其衍生物是对人体非常重要的一类具有生物功对婴儿大脑的发育及代谢具有至关重较单一，容易造成胆碱类物质缺失，害及肾脏损害等疾病
[1,2]
能的小分子代谢物，其重要意义在于能够促进神经元的信息传递，特别是要的作用。婴幼儿由于摄入的食物比可能因此造成免疫力降低、记忆力损GB 14880-2012对婴幼儿配方奶粉中为380～1 500 mg/kg[3]。
[4]
2 实验方法
2.1 实验原理
保证测试时滤液呈弱碱性，在37 ℃左右保温反应10～30 min，对样品溶
2.3.1 标准曲线
水解液进行净化，再经过酶氧化，然法进行测试。2.2 样品处理
胆碱经酸水解后，加入活性炭对
后发生显色反应，最后使用分光光度
取5 g（精确到0.000 1 g）样品，
。国家标准
准溶液，按表1加入试剂，然后按照
取2、4、6 mL与8 mL的胆碱标
胆碱的添加限量作了明确规定，限量盐比色法、高氯酸非水滴定法、雷氏盐质量法[6]等，由于选择性不好，差较大。
[7]
[5]
1 mol/L的盐酸溶液30 mL，放在 100 mL锥形瓶中，65～75 ℃水浴加热，不时震荡混匀，共需水解3 h，冷
试剂管A————0.1003.00—2.2中的方法进行处理。加入发色剂后，标准溶液发生颜色变化（见图1），混匀，将试管用密封膜密封，置于水浴中 37 ℃保温反应15 min。
管C————3.00—管D————3.00—比较常见的胆碱检测方法有雷氏却至室温并用氢氧化钠溶液（500 g/L）
稀释度1/（50 μg/mL）表1 标准曲线制备时的试剂添加量
0.100————3.00—管B背景干扰因素比较多，可造成检测偏2013采用酶反应显色分光光度计法进行奸恶，这种检测胆碱含量的方法，等发色物质，经水解后颜色加深，容易氧化反应，容易造成胆碱测定值偏低，定婴幼儿乳粉中胆碱的含量。优点是专属性较强，缺点是缺少对水解液的净化处理，其样品中的核黄素造成样品背景值增高；此外样品中含有的维生素C等还原性物质，会影响酶的为克服以上检测过程中出现的问题，本文将提出一种改良的酶比色法，用于测
现行国家标准GB/T 5413.20-
管E——0.100——3.00—管F———0.1003.00——稀释度2/（100 μg/mL）稀释度3/（150 μg/mL）标准溶液/（250 μg/mL）蒸馏水发色剂稀释度4/（200 μg/mL）0.1000.100试。通过以上的实验得出结论，加入0.6 g活性炭能使测定样品中还原型抗坏血酸完全氧化为脱氢型，其吸附影响不测定结果准确度较差，回收率和重现性降低。
明显。由对比试管F、G、H可以看出，
当不使用活性炭进行样品脱色处理时，
2.3.3 试样的测定
1 实验仪器与试剂
（T6新世纪）、电子天平（Metteler （HH-6）、pH计（PHS-3C），离心机。
试剂：99%胆碱酒石酸氢盐标准Toledo ML204）、数显恒温水浴锅
实验仪器：紫外可见分光光度计
影响
2.3.2 活性炭含量对测试结果的按表2中试剂的添加量要求，分
图1 标准溶液梯度颜色图
验，每个试样都准备（B、C）2支试管。混匀后将试管用密封膜密封，置于水
按表3所示的试剂添加量进行试
别投放在准备好的8支试管中进行测
加入发色剂后标准溶液开始颜色反应，
70 食品安全导刊 2019年9月
浴中37 ℃保温反应15 min。
3.2 实验结果
3 实验结果
3.1 标准曲线方程
取4种不同婴幼儿配方奶粉5 g，
2，相关系数标准曲线方程为R2=0.999 3，y=0.003 3线性良好x-0.018
用改进的方法进行检测，同一种样品取平行样，分别测胆碱含量，见表图2）。
（见3 mg/100 g）
（检出限为1 mg/100 g，定量限4。
为
表2 测定加标样时的试剂添加量
试剂
试管空白A试管B试管C试管D试管E试管F试管G还原型抗坏血酸胆碱加入量/g试样加标/g0.0试样加标试样加标试样加标试样乳粉试样乳粉试管试样乳粉H试样0.010.20.20.20.20.000.00.00.0待分析滤液活性炭/g0.0蒸馏水0.1000.00.1000.40.010.1000.60.010.1000.80.010.1001.00.1000.00.010.1000.00.010.1000.6发色剂/mL/mL/mL3.00胆碱含量/(mg/100 g）净吸光值0.0—00.5033.00—3.00——3.00—1450.530表3 试剂添加量表格
1620.5283.001600.5253.00—1570.5303.00—1620.5093.00—1500.530162待分析滤液试剂试管蒸馏水0.100B滤液空白试管发色剂/mL/mL/mL3.000.100C试样—3.00—图2 胆碱的标准曲线图
编号表4 胆碱含量
1-1净吸光值1-20.523胆碱含量/（mg/100 g）2-10.52516312-20.4861523-10.4881523-20.4524-10.4571374-20.4501390.452142141分析与检测
4 结论
方法进行改良，去除了维生素通过添加活性炭等步骤，对检测
原性物质对酶氧化反应的影响并减小C等还含量的测定更加准确、可行、高效。背景值，该方法对婴幼儿乳粉中胆碱
参考文献
[1]Ikarashi Y, Sasahara T, Maruyama Y. Determination of choline and acetylcholine levels in rat brain regions by liquid chromatography with electrochemical detection[J]. Journal of Chromatography A, 1985,322(1):191-199.
[2]姚新生.天然药物化学[M].北京:人民卫生出版社,2001.
[3]中华人民共和国卫生部.GB 14880-2012 食品营养强化剂使用卫生标准[S].北京:中国标准出版社,2012.
[4]赵红霞,郝万清.雷氏盐比色法检测婴幼儿配方乳粉中胆碱含量[J].乳业科学与技术.2012(2):45-47.
[5]宋荣,常碧影.氯化胆碱几种常用测定方法之比较[J].饲料广角.2001 (23):4.
[6]宋荣,常碧影.雷氏盐重量法测定饲料级氯化胆碱[J].饲料广角 2001(23):17-19.
[7]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.GB 5413.20-2013食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定[S].北京:中国标准出版社,2013.
基金项目：国家重大科学仪器开发专项“动态多谱分析仪器开发与应用研究”（编号：2012YQ09167）。
作者简介：张琳（1990—），女，汉族，吉林长春人，硕士，检验员。研究方向：食品及食用农产品安全方面的检验检测工作。
通讯作者：曲玉超（1983—），女，汉族，吉林长春人，硕士，助理工程师。研究方向：检验检测及环评等相关 工作。
Sep. 2019 CHINA FOOD SAFETY 71
